澳门·新葡萄新京威尼斯(国际)权威认证-BinG百科

均相酶免疫法检测血清甘胆酸的方法学评价

发布时间:2015-05-22阅读次数: 629


均相酶免疫法检测血清甘胆酸的方法学评价

【摘要】目的:对均相酶免疫法检测血清甘胆酸(CG)进行方法学评价。方法:用生化分析仪和均相酶免疫法测定CG,完成精密度、线性分析、回收试验及干扰试验,同时与放射免疫测定法进行比对试验。结果:该法批内、批间的变异系数均<5.0%,在0~60ug/ml范围内线性良好,相关方程为Y=1.014X-0.194,r=0.999;平均回收率为95.6%;50g/L血红蛋白、8.0mmol/L甘油三酯、100.0umol/L胆红素对结果干扰均<5.0%;与放射免疫测定法结果比对,回归方程为Y=1.030X-0.086, r=0.968,两者具有高度相关性。结论:该法重复性好,线性范围宽,抗干扰能力强,与放射免疫分析法检测结果具有高度相关性,适合在生化分析仪上进行自动分析。

【关键词】 甘胆酸 均相酶免疫法 方法学评价

CG是肝脏以胆固醇为原料合成的胆酸再与甘氨酸结合而成。当肝细胞受损伤、肝占位病变或胆汁淤积时,可引起CG代谢和循环紊乱,使血清中的CG量增加,CG测定广泛应用于肝病及妊娠期肝内胆汁淤积症的诊断与治疗[1-2]

1. 材料与方法

1.1 试剂与仪器 均相酶免疫法CG试剂、校准品及质控品为安徽澳门新葡萄新京威尼斯生物工程有限公司产品,采用日立7180分析仪完成相关检测。放射免疫法CG试剂为北京原子高科股份有限公司产品,采用CN20放免分析仪完成相关检测。

1.2 实验标本 为住院患者及健康体检者当天采集的血清,共50例,其中异常结果占25%,所有标本无溶血,无脂浊。

1.3 实验方法 严格按照仪器操作、试剂说明书及实验室技术操作规程进行检测。CG均相酶免疫试剂的分析参数:双波长340/405nm,试剂与标本比20:1,校准方法为多点定标。

1.4 统计学分析 以统计软件SPSS12.0对检测数据进行统计分析。

2. 结果

2.1 精密度分析

批內精密度:分别测定三个不同浓度的CG质控品,3h内重复测定10次,计算均值、SDCV

批间精密度:三个不同浓度的CG质控品分别测试3个不同批号的试剂,每个批号重复测试10计算均值、SD CV。精密度结果见附表1

附表1:均相酶免疫法测定CG的批内、批间精密度结果(ug/ml)

质控品浓度

批 内

x±s CV%

批 间

x ±s CV%

4.00

3.78±0.09

2.43

3.84±0.15

3.92

17.00

17.43±0.16

0.90

17.63±0.37

2.12

40.00

41.63±0.27

0.65

41.62±0.93

2.24

2.2 线性分析(ug/ml)

选取一份接近预期上限的标本重复测定3次,取均值作为理论值,然后用蒸馏水稀释形成梯度浓度的实验样本,将实验样本进行测定,每个浓度重复测定3次,计算均值。以样本的理论值为自变量,实测值为因变量作线性回归分析,CG线性分析结果见附表1。

附表2:CG线性分析结果ug/ml)

预期值

测定值

相关性分析

2.50

2.72

Y=1.014X-0.194

r=0.999

5.00

5.26

10.00

9.56

20.00

19.85

40.00

39.62

60.00

61.21

2.3 回收试验

取混合血清标本(浓度为2.80ug/ml)分为4份每份500ul,其中1份加入25ul的生理盐水另外3份分别加入浓度为10.020.0、40.060.0ug/mlCG标准液25μL对每例样本作双次测定,取均值,计算回收率。CG回收试验结果见附表3

附表3:CG回收试验结果(ug/ml)

测定值

加入浓度

回收率

平均回收率

2.80

/

/

95.6%

3.28

0.48

95.3%

3.75

0.95

96.4%

4.70

1.90

96.0%

5.66

2.86

94.8%

2.4 干扰试验

取混合血清标本(浓度为2.80ug/ml)分为4份每份500ul,其中一份加入100ul生理盐水,其它三份分别加入100ul的50.0g/L血红蛋白液、8.0mmol/L甘油三酯、100.0umol/L胆红素对每例样本作双次测定,取均值,计算偏倚。CG干扰试验结果见附表4。

附表4:CG干扰试验结果(ug/ml)

干扰物浓度

测定结果

干扰浓度

偏倚%

未加干扰物

2.35

/

/

8.33g/L血红蛋白

2.40

0.05

2.2%

1.33mmol/L甘油三酯

2.45

0.10

4.3%

16.67umol/L胆红素

2.42

0.07

3.0%

2.5 比对试验

选取住院患者及健康体检者当天采集的血清共50例,其中异常结果占25%。分别用均相酶免疫法试剂和放射免疫法试剂完成CG检测。两种试剂CG检测结果呈高度正相关(Y=1.030X-0.086, r=0.968)。

3. 讨论

1959年Yalow及Berson创建了放射免疫分析法(RIA),此法应用同位素标记及特异性高的抗原-抗体反应,对人体内的微量物质进行定量分析,其灵敏度可达到pg(10-12g)级水平,但RIA有其无法克服的放射性污染的缺点。1971年Engvall等在RIA原理的基础上发展了一种新的免疫分析方法—酶标记免疫分析法(ELISA),但ELISA操作较繁琐,反应时间长,一般用于定性或半定量分析。1972年Rubenstein及Ullolan,在酶标记抗原竞争法的基础上,创建了均相酶免疫分析方法(EMIT)[3]

EMIT是利用酶作为标记物,在均匀的液相中进行的免疫分析技术。与其它用酶为标记物的免疫方法不同,EMIT不需要分离抗原抗体复合物,整个反应过程在均一的液相中进行,没有酶量的变化,以酶活性的高低作为检测的指标,这样就能够达到快速与简便的要求[4]

CG检测方法有放射免疫分析法、胶乳免疫比浊法和均相酶免疫比色法。放射免疫分析法因为国家对同位素的严格管制以及放射性污染而逐渐被淘汰。胶乳免疫比浊法用于生化分析仪的自动化分析,具有灵敏度高、重复性好的特点,但胶乳颗粒具有较强的粘附性,容易污染比色杯并造成交叉污染。而均相酶免疫比色法不但具有胶乳免疫比浊法的优点,同时克服了其污染比色杯的弊端,为CG的自动化分析开辟了一条新的途径,具有良好的发展前景。

EMIT法检测CG原理:游离甘胆酸与葡萄-6-磷酸脱氢酶—甘胆酸偶联物竞争性结合抗甘胆酸特异性抗体位点,样本中游离甘胆酸越多,竞争结合抗体位点越多,抗体释放出的酶标偶联物就越多。游离出来的甘胆酸酶标偶联物催化β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(NAD)转化为β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(NADH)。样本中甘胆酸浓度与NADH生成量成正比,通过检测340 nm波长的吸光度变化即可计算出甘胆酸含量[5]

安徽澳门新葡萄新京威尼斯生物工程有限公司生产的甘胆酸均相酶免疫法试剂盒,具有灵敏度高、准确度好、重复性佳、抗干扰能力强、线性范围宽等特点,与放射免疫分析法的检测结果有高度相关性。与放射免疫分析法和胶乳免疫比浊法相比,具有相当的反应灵敏度,同时克服了同位素的放射性污染和胶乳颗粒污染比色杯的弊端,是适合在生化分析仪上进行自动分析的理想生化试剂。

参 考 文 献

1.杨礼彬.甘胆酸检测的临床应用.分析免疫与临床[J],1999,6(6):116-117.

2.张铭,左伟,周洪兴.清甘胆酸的测定在妊娠肝内胆汁淤积症中的诊断意义及与胎儿预后关系.中国妇幼保健[J],2005,20(19):2521-2522.

3.陶涵.均相酶免疫分析简述.药学通报[J],1987,12(22):745-747.

4.刘奉亭.均相酶技术进展.国外医学生物检验与检验学分册[J],1989,6(10):11-13.

5.甘胆酸试剂盒使用说明书.安徽澳门新葡萄新京威尼斯生物工程有限公司.

上一篇:澳门新葡萄新京威尼斯集团拟引入战略投资启动新三板上市

下一篇:我司组织员工参加拓展

新闻资讯

XML 地图